МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ И СОЦИАЛЬНОГО РАЗВИТИЯ 21 страница Главная страница сайта Об авторах сайта Контакты сайта Краткие содержания, сочинения и рефераты

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ И Общественного РАЗВИТИЯ 21 страничка


.

Читать реферат для студентов

наблюдается рост, после предварительного разведения до 10 КОЕ/мл делают

пересев по 0,1 мл на соответствующую стандартную агаризованную среду. После

инкубации описывают морфологические особенности колоний, подсчитывают

колонии тест-микроорганизмов и определяют коэффициент прорастания по

указанной выше формуле.

Испытуемая жидкая среда считается годной к употреблению, если коэффициент прорастания не менее 0,7 по сравнению со стандартной жидкой питательной средой.

Определение селективных свойств

Для оценки селективных свойств питательных сред испытуемую и стандартную среды заражают взвесью тест-микроорганизмов (монокультура) и параллельно смесью тест-штамма и штамма-ассоцианта в определенной пропорции. В случае нескольких штаммов-ассоциантов каждый из них смешивают с тест-микроорганизмом отдельно.

Посев на агаризованные среды осуществляют поверхностным методом. В 3

чашки с каждой средой (испытуемой и стандартной) вносят по 0,1 мл рабочей

взвеси монокультуры, содержащей около 10 КОЕ/мл. Параллельно в 3 чашки с

каждой средой вносят по 0,1 мл посевной дозы, содержащей взвеси

тест-микроорганизма и штамма-ассоцианта. На всех засеянных чашках после

оптимального срока инкубации при соответствующей температуре отмечают рост

характерных колоний тест-микроорганизма при отсутствии или угнетении роста

штамма-ассоцианта.

Для посева на жидкие питательные среды (стандартную и испытуемую) аналогично используют монокультуру тест-микроорганизма и посевную дозу тест-микроорганизма со штаммом-ассоциантом. В 3 пробирки каждой среды вносят по 1 мл рабочей взвеси монокультуры тест-микроорганизма. Параллельно в 3 пробирки вносят по 1 мл посевной дозы тест-микроорганизма и штамма-ассоцианта.

Для качественной оценки селективных свойств среды через 24 ч инкубации делают пересев из каждой пробирки, в которой наблюдают рост, бактериологической петлей на чашки с соответствующей агаризованной средой. После инкубации на чашках должен наблюдаться рост характерных колоний тест-микроорганизма при отсутствии или угнетении роста штамма-ассоцианта.

Для характеристики питательных сред учитывают коэффициент прорастания и селективные свойства, а также морфологию выросших колоний.


Таблица 32.7

Тест-микроорганизмы и условия инкубации для

определения ростовых и селективных свойств

питательных сред

┌────────────────────────┬──────────────┬──────────────────────────────────┬───────────────────────┐

│ Питательные среды │ Назначение │ Тест-микроорганизмы │ Время и температура │

│ │ │ │ инкубации │



├────────────────────────┼──────────────┼──────────────────────────────────┼───────────────────────┤

│ 1 │ 2 │ 3 │ 4 │

├────────────────────────┼──────────────┼──────────────────────────────────┼───────────────────────┤

│- Соево-казеиновый агар │Аэробные │Bacillus subtilis ATCC 6633 или │72 ч │

│- Среда N 1 для │бактерии │Bacillus cereus ATCC 10702; │(32,5 +/- 2,5) град. C │

│выращивания бактерий │ │Escherichia coli ATCC 25922; │ │

│ │ │Staphylococcus aureus ATCC 6538-P │ │

├────────────────────────┼──────────────┼──────────────────────────────────┼───────────────────────┤

Загрузка...

│- Сабуро агар с глюкозой│Дрожжи, │Candida albicahs NCTC 885-653 или │5 сут. │

│и антибиотиками │плесени │Candida albicans ATCC 10231; │(22,5 +/- 2,5) град. C │

│- Среда N 2 для │ │Aspergillus niger ATCC 9642 │ │

│выращивания грибов │ │ │ │

│ │ │Штаммы-ассоцианты: │ │

│ │ │Staphylococcus aureus ATCC 6538-P │ │

│ │ │Bacillus cereus ATCC 10702 │ │

├────────────────────────┼──────────────┼──────────────────────────────────┼───────────────────────┤

│- Бульон Мосселя │Обогащение │Escherichia coli ATCC 25922; │24-48 ч │

│- Мак-Конки бульон │энтеробактерий│Salmonella abony IHE 103/39 │(32,5 +/- 2,5) град. C │

│- Среда N 3 для │ │ │ │

│обогащения │ │Штаммы-ассоцианты: │ │

│энтеробактерий │ │Staphylococcus aureus ATCC 6538-P │ │

│ │ │Bacillus cereus ATCC 10702 │ │

├────────────────────────┼──────────────┼──────────────────────────────────┼───────────────────────┤

│- Мак-Конки агар │Энтеробактерии│Escherichia coli ATCC 25922; │24-48 ч │

│- Мосселя агар │ │Salmonella abony IHE 103/39 │(32,5 +/- 2,5) град. C │

│- Среда N 4 для │ │ │ │

│выделения энтеробактерий│ │Штаммы-ассоцианты: │ │

│ │ │Staphylococcus aureus ATCC 6538-P │ │

│ │ │Bacillus cereus ATCC 10702 │ │

├────────────────────────┼──────────────┼──────────────────────────────────┼───────────────────────┤

│- Дезоксихолат-цитратный│Сальмонеллы │Salmonella abony IHE 103/39 │24-48 ч │

│агар │ │ │(32,5 +/- 2,5) град. C │

│- Ксилоза-лизин- │ │Штаммы-ассоцианты: │ │

│дезоксихолат агар │ │Escherichia coli ATCC 25922 │ │

│- Агар с бриллиантовым │ │Staphylococcus aureus ATCC 6538-P │ │

│зеленым │ │Bacillus cereus ATCC 10702 │ │

│- Висмут-сульфитный агар│ │ │ │

│- Среда N 5 для │ │ │ │

│идентификации сальмонелл│ │ │ │

├────────────────────────┼──────────────┼──────────────────────────────────┼───────────────────────┤

│- Бульон с глюкозой │Энтеробактерии│Escherichia coli ATCC 25922; │24 ч │

│- Среда N 6 для │ │Salmonella abony IHE 103/39; │(32,5 +/- 2,5) град. C │

│идентификации │ │Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027 │ │

│энтеробактерий │ │(P.aeruginosa ГИСК 453) │ │

├────────────────────────┼──────────────┼──────────────────────────────────┼───────────────────────┤

│- Нитратный бульон │Энтеробактерии│Escherichia coli ATCC 25922; │24 ч │

│- Среда N 7 для │ │Salmonella abony IHE 103/39; │(32,5 +/- 2,5) град. C │

│идентификации │ │Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027 │ │

│энтеробактерий │ │(P.aeruginosa ГИСК 453) │ │

├────────────────────────┼──────────────┼──────────────────────────────────┼───────────────────────┤

│- Соево-казеиновый │Аэробные │Bacillus cereus ATCC 10702 или │24 ч │

│бульон │бактерии │Bacillus subtilis ATCC 6633; │(32,5 +/- 2,5) град. C │

│- Среда N 8 для │ │Escherichia coli ATCC 25922; │ │

│выращивания бактерий │ │Staphylococcus aureus ATCC 6538-P;│ │

│ │ │Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027 │ │

│ │ │(P.aeruginosa ГИСК 453) │ │

├────────────────────────┼──────────────┼──────────────────────────────────┼───────────────────────┤

│- Лактозный бульон │Энтеробактерии│Escherichia coli ATCC 25922; │24 ч │

│- Среда N 11 для │ │Salmonella abony IHE 103/39 │(32,5 +/- 2,5) град. C │

│предварительной │ │ │ │

│инкубации энтеробактерий│ │ │ │

├────────────────────────┼──────────────┼──────────────────────────────────┼───────────────────────┤

│- Агар для выявления │Синегнойная │Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027 │24-48 ч │

│пиоцианина P.aeruginosa │палочка │(P.aeruginosa ГИСК 453); │(32,5 +/- 2,5) град. C │

│- Среда N 9 для │ │Escherichia coli ATCC 25922 │ │

│идентификации │ │ │ │

│P.aeruginosa │ │ │ │

├────────────────────────┼──────────────┼──────────────────────────────────┼───────────────────────┤

│- Цетримидный агар │Синегнойная │Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027 │24-48 ч │

│- ЦПХ-агар │палочка │(P.aeruginosa ГИСК 453) │(32,5 +/- 2,5) град. C │

│для выделения │ │ │ │

│P.aeruginosa │ │Штаммы-ассоцианты: │ │

│ │ │Escherichia coli ATCC 25922; │ │

│ │ │Staphylococcus aureus ATCC 6538-P │ │

├────────────────────────┼──────────────┼──────────────────────────────────┼───────────────────────┤

│- Фогель-Джонсона агар │Золотистый │Staphylococcus aureus АТСС 6538-Р;│48 ч │

│- Среда N 10 для │стафилококк │Staphylococcus epidermidis АТСС │(32,5 +/- 2,5) град. C │

│выделения S.aureus │ │14990 │ │

│- Берда-Паркера агар │ │ │ │

│ │ │Штаммы-ассоцианты: │ │

│ │ │Pseudomonas aeruginosa АТСС 9027 │ │

│ │ │(P.aeruginosa ГИСК 453); │ │

│ │ │Escherichia coli АТСС 25922 │ │

├────────────────────────┼──────────────┼──────────────────────────────────┼───────────────────────┤

│- Селенитовый бульон │Сальмонеллы │Escherichia coli АТСС 25922; │18-24 ч │

│- Тетратионатный бульон │ │Salmonella abony IHE 103/39 │(32,5 +/- 2,5) град. C │

│- Среда N 12 для │ │ │ │

│выделения сальмонелл │ │ │ │

├────────────────────────┼──────────────┼──────────────────────────────────┼───────────────────────┤

│- Трехсахарный агар с │Сальмонеллы │Escherichia coli ATCC 25922; │24 ч │

│солями железа │ │Salmonella abony IHE 103/39 │(32,5 +/- 2,5) град. C │

│- Среда N 13 для │ │ │ │

│идентификации сальмонелл│ │ │ │

├────────────────────────┼──────────────┼──────────────────────────────────┼───────────────────────┤

│- Цитратный агар │Кишечная │Escherichia coli ATCC 25922; │24 ч │

│Симмонса │палочка │Salmonella abony IHE 103/39 │(32,5 +/- 2,5) град. C │

│- Среда N 14 для │ │ │ │

│идентификации E.coli │ │ │ │

└────────────────────────┴──────────────┴──────────────────────────────────┴───────────────────────┘


ATCC - Американская коллекция типовых культур (American Type Culture Collection), Соединенные Штаты Америки.

ГИСК - Всероссийский музей патогенных бактерий ГИСК им. Л.А.Тарасевича, Россия.

IHE - Институт гигиены и эпидемиологии, Прага, Чехия.

CCM - Чешская коллекция микроорганизмов.

Требование к ростовым свойствам питательных сред

Испытуемая агаризованная среда считается годной к употреблению, если коэффициент прорастания не менее 0,7 по сравнению со стандартной питательной средой. Испытуемая жидкая (полужидкая) среда считается годной к употреблению, если после инкубации рабочей взвеси и пересеве подходящего разведения на агаризованную среду коэффициент прорастания не менее 0,7 по сравнению со стандартной жидкой питательной средой.

Требование к селективным свойствам питательных сред

Испытуемая селективная питательная среда при посеве тест-микроорганизма и штамма-ассоцианта должна обеспечивать доминирующий рост тест-микроорганизма при частичном или полном угнетении роста штамма-ассоцианта.

Стерильность

Не менее 10% емкостей (флаконов, пробирок) от каждой партии приготовленной питательной среды контролируют на стерильность, выдерживая их при соответствующей температуре в течение 48-72 ч. При обнаружении микробного роста хотя бы в одной из емкостей, испытанию на стерильность подлежит вся приготовленная партия среды.

Хранение питательных сред

Сухие питательные среды необходимо хранить в сухом, защищенном от света месте при температуре 2-30 град. C герметично закрытыми. После вскрытия упаковки на флаконе необходимо написать дату и далее хранить при комнатной температуре до окончания срока годности.

Приготовленные из сухих смесей и разлитые во флаконы питательные среды хранятся 1 месяц при комнатной температуре или 3 месяца при (5 +/- 1) град. C.

Срок годности сред, разлитых в чашки, составляет 7 дней при температуре (5 +/- 1) град. C.

Исключение составляют чашки со средой N 4, срок годности которых не более 3 сут. без доступа света.

33. ОПРЕДЕЛЕНИЕ АНТИМИКРОБНОЙ АКТИВНОСТИ АНТИБИОТИКОВ

МЕТОДОМ ДИФФУЗИИ В АГАР (ОФС 42-0068-07)

Определение антимикробной активности антибиотиков основано на их способности угнетать рост микроорганизмов. Определение проводят методом диффузии в агар на плотной питательной среде путем сравнения размеров зон угнетения роста тест-микробов, образующихся при испытании растворов определенных концентраций Государственного стандартного образца и испытуемого препарата.

--------------------------------

Далее "стандартный образец" следует читать "Государственный стандартный образец".

Антимикробная активность антибиотиков выражается в единицах действия - ЕД или "мкг". Для большинства антибиотиков 1 ЕД или "мкг" соответствуют 1 мкг активного вещества (кислоты или основания); для антибиотиков, имеющих иное количественное выражение единицы, соответствующие указания даются в частных фармакопейных статьях.

При определении антимикробной активности антибиотиков используют стандартные образцы, активность которых, как правило, устанавливают в соответствии с Международными биологическими стандартами. При отсутствии последних для указанных целей могут быть использованы международные химические стандарты, антимикробную активность которых рассчитывают на основании показателей качества, установленных физико-химическими методами. Антимикробную активность стандартных образцов антибиотиков, не имеющих аналогов в международной коллекции стандартов, рассчитывают также на основании показателей качества, установленных физико-химическими методами.

Стандартные образцы антибиотиков хранятся и используются в соответствии с рекомендациями, указанными на этикетке стандартного образца.

Метод определения. Тест-микробы, растворители, буферные растворы, питательные среды и прочие условия проведения испытания указаны в табл. 33.1.

В чашки Петри (стеклянные или пластмассовые), установленные на столиках со строго горизонтальной поверхностью, разливают расплавленные питательные среды определенного состава в один или два слоя. Для нижнего слоя используют незасеянные среды, для верхнего или одного слоя - агаровую среду, предварительно засеянную соответствующим тест-микробом. Если культура представляет собой суспензию вегетативных клеток, то температура расплавленной среды, в которую вносят тест-микроб, должна быть (49 +/-1) град. C, при использовании суспензии спор - 65-70 град. C. К среде следует добавить такое количество суспензии вегетативных клеток или спор, которое обеспечивает оптимальный рост тест-микроба и четкость зон угнетения его роста.


Таблица 33.1

Характеристика культуральных свойств тест-микроба

┌──────────────────┬─────────────────────────────────────┬──────────────────────────────┬───────────────────┐

│ Название │ При росте на плотной питательной │ При росте на жидкой │ При │

│ тест-микроба │ среде │ питательной среде │ микроскопическом │

│ ├──────────────────┬──────────────────┼────────────┬─────────────────┤ изучении мазка │

│ │ условия │ описание │ условия │описание культуры│агаровой культуры, │

│ │ выращивания │ культуры │выращивания │ │окрашенной по Граму│

├──────────────────┼──────────────────┼──────────────────┼────────────┼─────────────────┼───────────────────┤


Другие страницы сайта


Для Вас подготовлен образовательный материал МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ И СОЦИАЛЬНОГО РАЗВИТИЯ 21 страница

5 stars - based on 220 reviews 5
  • Жан-Батист Мольер. Тартюф, или Обманщик 2 страница
  • Прокладочные материалы
  • Ребекка Донован Любить – значит страдать 19 страница
  • Закон України "Про залізничний транспорт України" 3 страница
  • Жил-был в Ирландии мальчик, который хотел знать все на свете и читал книгу за книгой, пока мозги у него не распухли от астрономии, математического анализа, квантовой физики, романтической поэзии, 9 страница
  • Расчёт мощности на вводе в здание определяется путём составления технологического графика нагрузок.
  • За допомогою податків перерозподіляються:
  • Принцип головоломки #10: Сдвиги восприятия – это палка о двух концах